转录组链特异建库该考虑吗？

关于链特异性测序的若干问题，很久以前就以为自己想清楚了，但是每次提起它的时候又容易重新产生各种各样的小困惑。于是整理一下，以免以后再时不时犯迷糊。很多东西就是这样，你以为的明白并不是真的明白，一年前的明白和一年后的明白也不是同一个明白。我这么说，不知道你能明白还是不明白。RNA-seq基本流程下图是一个大概的RNA-seq基本流程把RNA破碎成小片段，然后将RNA转变成一条cDNA，这一步需要用到反转录酶 reverse transcriptase (RT) 才能用RNA作为模板合成DNA。不论是转录还是反转录都需要引物。通常如果我们要mRNA，那就可以用oligo-dT作为RT的引物，但是用它有两个问题，第一个是只能反转录那些有A尾巴的RNA，第二个问题是RT不是一个高度持续性的聚合 ………………………………