主要观点总结
文章介绍了Western Blot实验中的常见问题及其原因和解决方案,包括表情包型结果、2B型结果、艺术型结果和猫猫型结果,并提供了针对每种问题的建议。文章目的是帮助实验室人员解决WB实验中的困扰,提高实验效果。
关键观点总结
关键观点1: Western Blot作为分子生物学的经典实验技术,可以检测目标蛋白的表达情况,为研究提供关键线索。
文章介绍了WB实验中的常见问题和解决方案,包括表情包型、2B型、艺术型和猫猫型结果,这些结果都是实验人员在实践中遇到的挑战。
关键观点2: 表情包型结果的原因包括蛋白上样量过多、目标蛋白表达量过高,建议适当减少蛋白上样量、降低抗体浓度。
关键观点3: 2B型结果的原因包括抗体浓度过高、孵育时间过长、封闭不充分,建议降低抗体浓度、缩短孵育时间、延长封闭时间并确保封闭液的新鲜和均匀。
关键观点4: 艺术型结果包括水墨画和抽象艺术画,原因可能是抗体特异性稍差或样品中存在非特异性蛋白,建议选更特异性抗体或在样品处理时加入蛋白酶抑制剂。
关键观点5: 猫猫型结果的原因包括蛋白降解、样品处理不当,建议加入蛋白酶抑制剂、优化裂解条件、确保样品保存的稳定。
文章预览
Western Blot(WB)作为分子生物学的经典实验技术,几乎是每一位生物学霸的必修课。它不仅可以检测目标蛋白的表达情况,还能通过条带的强弱、位置等信息,为研究提供关键线索。 不过,WB 实验有时能让你欲哭无泪。今天学霸君整理了一些当代 WB「疯癫」作品集,顺便分享一些经验教训, 希望对正在实验室里「摸鱼」的你有所帮助。 类型一:表情包型结果 跑出惊叹号(!) 网友投稿自己的 WB 结果,像一个大大的惊叹号,条带清晰,但一点用没有。 这可能是因为蛋白表达量过高,或者上样量过多导致的。 图源:网络 原因—— 蛋白上样量过多,导致条带过于集中。 目标蛋白本身表达量过高,掩盖了其他条带。 建议—— 适当减少蛋白上样量,或者对样品进行稀释后再上样。 如果目标蛋白本身就高表达,可以尝试降低抗体浓度,避免过度显色。
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