实验五 | DNA的体外连接(知识分享)

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图片来源：网络 DNA的体外连接是分子生物学中一项重要的技术，它涉及到在一定条件下，利用DNA连接酶催化两个双链DNA片段的5’端磷酸与3’端羟基之间形成磷酸二酯键，从而完成DNA片段的连接。 DNA体外连接是在DNA连接酶的作用下，将两个具有匹配末端的DNA片段(可以是粘性末端或平末端)连接成一个完整的DNA分子的过程。这一过程是在体外进行的，不需要细胞内的复杂环境 。 常用的DNA连接酶主要有两种: 来自 大肠杆菌(E.coli)的DNA连接酶 和来自 噬菌体T4的DNA连接酶(T4 DNA连接酶) 。 E.coli DNA连接酶 是由E.coli基因lig编码，需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)作为辅助因子。它主要用于修复双链DNA上的单链缺刻，并连接匹配的粘性末端。 T4 DNA连接酶 从T4噬菌体感染的E.coli中分离得到，由T4基因DNA30编码，需要ATP作为辅助因子。它不仅可以连接匹配的粘性末端， ………………………………