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手把手教学|细胞稳定转染的操作步骤及经验分享

生命科学技术摘集  · 公众号  ·  · 2024-07-18 18:15

主要观点总结

本文介绍了慢病毒转染在细胞稳定转染中的应用。内容包括实验步骤和注意事项。实验步骤包括准备细胞、转染操作、收集病毒和包装病毒。注意事项涉及实验操作的安全性和病毒液的储存方式。文章还提供了参考资料和公众号、视频号的推荐。

关键观点总结

关键观点1: 慢病毒转染是一种有效的基因传递技术,广泛应用于基因功能研究和细胞工程。

慢病毒载体能够稳定地整合目的基因序列到宿主细胞基因组中,实现长期稳定的表达。

关键观点2: 实验步骤包括细胞准备、转染、病毒收集和病毒包装。

在转染前需要对细胞进行充分培养,确保细胞能够充分贴壁。转染过程中需要制备混合物,包括目的质粒和病毒包装质粒,然后将混合物加入培养皿中进行转染。收集病毒液后,需要进行消毒处理。

关键观点3: 实验操作需注意安全和消毒。

进行慢病毒相关实验时要注意安全,穿实验服,戴口罩和手套。在操作病毒时要小心,避免产生气雾或飞溅。所有接触过病毒的工具都需要彻底消毒后再进行处理。


文章预览

细胞稳定转染是一种常用的基因传递技术,其中慢病毒转染作为一种有效的手段被广泛采用。通过慢病毒载体,可将目的基因序列稳定地整合到宿主细胞基因组中,实现长期稳定的表达。这种转染方法不仅能够在多种细胞系中高效地实现基因传递,还能够实现对特定基因的稳定表达,为基因功能研究和细胞工程提供了重要工具。 早在1981年,科学家们发现并研究了人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1),从而掀开了慢病毒作为载体的研究序幕。慢病毒(Lentivirus)载体是通过对HIV-1进行改造而得到的,其具备感染细胞的能力,包括分裂期和非分裂期细胞,同时在宿主体内能够实现长期表达且具备较高的安全性。这种载体能够稳定表达外源基因,具有广泛的感染范围等优势,因此在基因过表达、RNA干扰、miRNA研究等实验中得到广泛应用。 一、实验步骤 1、提前一 ………………………………

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