实验解析｜引物设计与验证的注意事项

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前置知识 引物是一种短的DNA或RNA序列，用于在PCR（聚合酶链式反应）和其他分子生物学技术中扩增和检测特定的DNA或RNA序列。 引物通过与目标序列的互补碱基配对来定向扩增所需的DNA或RNA片段。在分子生物学研究中，引物的设计是非常重要的一步，因为它直接影响到PCR扩增的特异性和灵敏度。 以下是文章作者“我叫一休”同学汇总的 关于引物设计和验证 的经验心得，希望能对大家的实验有帮助。 一、 普通 PCR 与荧光定量 PCR 引物设计上的相同注意点 1. 序列的查找是一致的，在 NCBI 上搜索不同物种的同一基因，序列选取应在基因的保守区段，选择合适片段长度 2. 引物长度（ primer length ）常用的是 18-27bp ，但不应大于 38bp ，因为过长会导致其延伸温度太高，不适合 DNA 聚合酶进行反应 3.3’ 端最好不要有 A ， 5’ 端可以容忍二聚体，但 3’ 端一定 ………………………………