检测SNP的引物探针怎么设计？

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SNP引物和探针的原理在于探针退火温度： SNP的引物探针还是比较讲究的，首先探针的Tm值要比引物高5℃左右，保证引物延伸的时候探针正在模板上卧轨，等待被水解。 SNP检测尽量用MGB探针，由于MGB这种淬灭集团会结合到DNA的小沟，提高Tm值，也就是说普通探针要二三十个碱基才能达到的Tm值，MGB探针十多个就可以达到了。 比如MGB探针如果15个碱基就能达到对应的Tm值，普通探针需要25个，那探针中单个碱基的变化，在MGB探针中就是1/15的温度差，而普通探针则是1/25。MGB探针对于SNP检测的敏感度就更高了…… 举个栗子，探针设计时候温度都是65℃，探针C能完全匹配，那么65℃的时候，探针还有一半结合在模板上。而探针A不能完全匹配到模板，Tm值就变成了65℃-1/15×65 ………………………………