实验解析｜慢病毒感染

主要观点总结

文章介绍了慢病毒载体化的背景、原理、实验步骤、注意事项以及应用。慢病毒载体通过改造HIV-1得到，能感染多种细胞并长期表达外源基因。文章详细描述了慢病毒在基因表达、RNA干扰、miRNA研究等领域的应用，以及实验步骤中的细胞准备、病毒感染、换液、荧光观察/抗性药物筛选、稳定细胞株筛选、筛单克隆等流程。同时，文章还强调了实验操作的注意事项，如病毒操作的生物安全、慢病毒的储存条件、细胞密度控制、药物使用等。

关键观点总结

关键观点1: 慢病毒载体化的背景和原理

文章介绍了慢病毒载体化的起源，通过对HIV-1的改造得到慢病毒载体，其采用VSVG外壳能感染多种细胞，包括分裂期和非分裂期细胞等。这种特性使得慢病毒成为了一种稳定表达外源基因、感染谱广泛的有效工具。

关键观点2: 实验步骤

文章详细描述了慢病毒感染实验的步骤，包括细胞准备、病毒感染、换液、荧光观察/抗性药物筛选、稳定细胞株筛选、筛单克隆等流程。每个步骤都有具体的时间和操作要求，以确保实验的顺利进行。

关键观点3: 注意事项

文章强调了实验操作的注意事项，包括病毒操作的生物安全、慢病毒的储存条件、细胞密度控制、药物使用等。这些注意事项对于确保实验的成功和人员的安全至关重要。

文章预览

一、背景及原理 自1981年首次发现人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）以来，慢病毒的载体化研究迅速展开。慢病毒（Lentivirus）载体是通过对HIV-1进行改造而得到的，其采用了VSVG外壳，这使得慢病毒能够感染更多类型的细胞，包括分裂期和非分裂期细胞、干细胞以及原代培养的细胞。这种特性使得慢病毒能够在宿主细胞中实现较长期的外源基因表达，并且具有较高的安全性。因此，慢病毒成为了一种稳定表达外源基因、感染谱广泛的有效工具，在基因过表达、RNA干扰、miRNA研究等领域得到了广泛应用，为研究启动子调控、基因的过表达或者沉默等提供了有力支持。 其原理首先是将所需基因组整合到慢病毒载体中，然后将该载体转染至携带包装蛋白的细胞中。细胞内表达的包装蛋白能够与慢病毒载体结合，将外源基因组包装成慢病毒颗粒。最终，这些颗粒 ………………………………