qPCR实验和WB实验结果「不一致」？

主要观点总结

本文主要分析了qPCR和WB实验在基因和蛋白定量中的不可或缺的角色，并探讨了二者结果不一致的可能原因。文章从实验技术层面、生物学层面以及数据处理与分析层面进行了详细分析，并讨论了结果不一致情况下的进一步研究和验证方法。

关键观点总结

关键观点1: 实验技术层面的原因

包括样品制备与处理的失误、实验操作的精确性问题等，可能导致qPCR和WB实验结果的不一致。

关键观点2: 生物学层面的原因

包括翻译后调控或修饰、延迟效应、mRNA剪接多变数、蛋白翻译后的稳定性以及负反馈机制调节等，这些因素影响蛋白质的稳定性和活性，可能导致mRNA和蛋白质水平的不一致。

关键观点3: 数据处理与分析层面的原因

包括定量方法的差异和结果解读的主观性，这两种方法可能在定量范围和灵敏度上存在差异，导致结果不一致。

关键观点4: 结果讨论与进一步验证

在基因的转录过程中，基因会产生mRNA，再翻译成蛋白质。但mRNA水平和蛋白质水平的不一致可能存在着其他的调控机制。对样品质量问题进行排查，技术误差和数据归一化分析，使用其他方法如ELISA、Northern blot或RNA-Seq验证是必要的。

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作者 | NIRO 来源 | NIRO（ID：NIRO-keyanmiao） 编辑 | 澹泊研究僧 我们知道对基因和蛋白定量中qPCR和WB实验是不可缺少的实验，二者相辅相成，相互验证。在理论上，qPCR实验结果和WB实验结果趋势是一致的。 但是如果出现qPCR实验结果和WB实验结果的趋势不一致怎么回事呢？ 图片来源: 网络 其实这种实验结果趋势不一致在实际情况中是比较常见的现象！下面我们先从实验技术层面、生物学层面及 数据处理与分析层等 三个方面进行分析。 qPCR实验和WB实验结果不一致的原因分析 1. 实验技术层面的原因 (1) 样品制备与处理 在qPCR中，如果 总RNA样品提取环节 出现失误，如取材到液氮速冻耗时过长导致RNA降解，或在制样时没有保持低温环境、没有有效防范外源性RNA酶的污染，都可能影响RNA的质量和qPCR结果的准确性。 在WB实验中， 蛋白样品制备环节同样至关重 ………………………………