手把手教学｜BCA法检测蛋白浓度

文章预览

一、  实验原理 BCA是一种碱性的水溶性复合物，性质稳定。在其提供的碱性环境下，蛋白质可以将BCA试剂中的Cu 2+ 还原为Cu + ，Cu + 继而与BCA试剂螯合，从而产生蓝紫色的络合物，在562nm波长处具有强吸收峰，通过测定吸光度，结合标准曲线即可得知蛋白浓度。BCA法因抗干扰性强、简便准确，灵敏度高而得到广泛应用，但其也易受温度、孵育时间的影响。 二、  实验步骤（ 视试剂盒而定 ） 1)  蛋白标准品配制 室温完全溶解蛋白标准品,取20µl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1.0 mg/ml。 2)  配制BSA标准测定溶液 3)  工作液配制 将A液与B液按照50:1的比例混合，配成BCA工作液，并混匀。注：此处一定要精准计算待测孔所用工作液的量，如测定4个蛋白样本，均做3个复孔，那么加上标曲一共有39孔，每个测定孔均需加入200µl的工作液， ………………………………