《合成生物学》推荐 | 天大罗云孜等通过结构域混编获得PAM更宽松的Cas12a

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Cas12a是一种广泛应用于多种生物基因组编辑的可编程核酸酶，但其应用受到PAM识别限制。为了减轻PAM的限制，蛋白质工程被应用于扩大其PAM的识别范围。近日，来自天津大学的 罗云孜 等人在 ACS Synthetic Biology  上发表文章“ Hybrid Cas12a Variants with Relaxed PAM Requirements Expand Genome Editing Compatibility ”。 作者通过结构域混编的方法设计构建了990个合成的杂合Cas12a嵌合体，筛选出了一种高效的杂合Cas12a (ehCas12a)，该杂合Cas12a能够识别范围较广的5′-TYYN-3 ′  (Y为T或C, N为a、T、C或G)PAM。  此外，作者构建了ehCas12a的变体ehCas12a RRVR (T167R/N572R/K578V/ N582R)。将PAM偏好扩展到5′-TNYN, TWRV-3′ (W为A或T, R为A或G, V为A, C或G)，可以有效识别Cas12a型蛋白及其突变体难以识别的-2* A/G PAM。  最后，作者证明了失活的ehCas12a RRVR碱基编辑器(dehCas12a RRVR- BE)能够靶向体内非规范PAMs和疾病 ………………………………