主要观点总结
本文介绍了一种新的评估mRNA完整性的方法——3':5'三重数字PCR检测法。该方法基于数字PCR技术，能够直观、简便地评估mRNA完整性，具有快速、准确、灵敏度高、不受抑制物影响等优点。文章还介绍了该方法的实验流程、结果验证以及结论讨论。
关键观点总结
关键观点1: 新的评估mRNA完整性方法
采用数字PCR技术，通过测定mRNA的3':5'比例来评估其完整性，实现绝对定量。
关键观点2: 实验流程
采用三重数字PCR检测方法，设计针对所选基因的3'端、中心和5'端的引物和探针，进行逆转录和PCR扩增检测。
关键观点3: 结果验证
通过线性回归模型校正分析相关性，验证实验结果的可靠性。
关键观点4: 方法优点
该方法具有快速、直观、简便、灵敏度高、不受抑制物影响等优点。
关键观点5: 应用领域
该方法在基因表达分析、临床和分子研究中具有广泛的应用前景。
文章预览
导读 精准评估mRNA完整性对于获得可靠的基因表达数据至关重要，如在临床和分子研究中的RT-qPCR或RNA测序分析表达谱。由于mRNA仅占RNA总量的5%，而核糖体RNA（rRNA）占了最大的比重，因此评估mRNA完整性的技术应该是针对mRNA本身。另外，RNA提取的污染物也可能导致检测偏差。 RNA完整性最早通过检测琼脂糖凝胶上的28S和18S rRNA条带来进行评估，但该技术上样量大(~300ng)、耗时、无法准确定量且不确定性强。毛细管电泳系统出现后，实现了用快速、可重复和自动化的方式进行RNA完整性评估，但很大程度上评估的是核糖体18S和28S RNA而不是mRNA本身的定量和完整性，因此作为完整性指标存在争议。基于3':5'的逆转录定量PCR (RT-qPCR) 可以直接测定mRNA的完整性，成为毛细管电泳的替代方法，但标准曲线的使用和PCR抑制剂的存在导致方法过程繁琐和结果的不稳定。 本
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