手把手教学｜基因过表达如何构建载体

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基因过表达即将目的基因的编码序列克隆到相应的质粒或病毒载体上，从而使基因在人为控制的情况下实现大量转录和翻译，实现基因的过表达。在整个实验过程中载体构建是整个实验的开始。 实验步骤： 1.PCR目的基因片段（如已有目的基因片段可忽略）： 选择细胞提RNA,逆转录成cDNA，根据PCR酶配置相应体系进行PCR，得到相应的目的基因片段，同时跑琼脂糖凝胶进行酶切鉴定，根据目的基因的片段大小判断条带应该出现的位置，根据位置判断酶切目的基因片段是否成功。 2.双酶切目的基因： 酶切位点选择和过表达载体相同的酶切位点，常见酶切体系如下： 37℃酶切1h。 3.双酶切过表达载体（以常见的过表达载体plvx-IRES-neo为例）： 选择和目的基因片段相同的酶切位点，以相同条件进行酶切，酶切完成后需跑琼脂糖凝胶鉴定载体酶切是否成功，同时 ………………………………