转染试剂太贵？可以试试20世纪80年代发现ras基因的方法

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磷酸钙转染法具体步骤 磷酸钙转染法是一种经典的基因转染技术，通过在细胞培养基中形成DNA-磷酸钙沉淀，使细胞摄取外源DNA。以下是磷酸钙转染的具体步骤： 一、材料与试剂 1. 试剂： • 质粒DNA（高纯度，无内毒素） • 氯化钙（CaCl₂）溶液，2.5 M • 2X HEPES缓冲盐溶液（2X HBS） • 配方：50 mM HEPES，280 mM NaCl，1.5 mM Na₂HPO₄，pH 7.05 • 细胞培养基 • 无血清培养基（如DMEM） • 含血清培养基（如10% FBS的DMEM） • PBS缓冲液 2. 设备： • 无菌离心管（1.5 mL、15 mL） • 微量移液器和无菌吸头 • CO₂培养箱 • 倒置显微镜 • 细胞培养板（6孔板、12孔板、24孔板等，根据实验需要） 二、试剂的准备 1. 2X HEPES缓冲盐溶液（2X HBS）的配制 配方（100 mL）： • 50 mM HEPES（游离酸形式）：11.9 g • 280 mM NaCl：1.64 g • 1.5 mM Na₂HPO₄：0.027 g • 用超纯水 ………………………………