Western blot实验细节之甲醇浓度选择

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有时候是不是疑惑明明所有操作步骤不是严格按照 Protocol 进行，但蛋白显影时就是没有条带。据统计， 80% 的 WB 背景高、信号弱或条带扭曲问题都与甲醇浓度不当直接相关！而绝大多数新手会盲目照搬师兄师姐 Protocol 中的“ 10% 甲醇”浓度进行 WB 实验。那么， 10% 的甲醇真的是万能的吗？真的适合所有情况吗？本期，小橙子为大家详细介绍不起眼的“甲醇”如何操控你的 WB 结果。 一、甲醇在 Western blot 中的作用 ✅  固定蛋白至 PVDF 膜 ：甲醇使 SDS 从蛋白上脱离从而促进蛋白与 PVDF 膜结合（ 尤其对疏水性蛋白至关重要 ）。 ✅  增加蛋白溶解度 ：甲醇作为有机溶剂，能增加蛋白在转膜液中的溶解度；   ✅  去除 SDS ：防止 SDS 干扰抗体与抗原结合； ✅  提高信噪比： 甲醇可以与膜上的非特异性结合的杂质结合，从而降低背景信号，提高特异性信 ………………………………