手把手教学｜CRISPR-Cas9系统：慢病毒转染

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CRISPR慢病毒转染法是一种高效引入CRISPR基因编辑系统到目标细胞中的技术，旨在实现对基因的有针对性编辑或调控。 实验步骤： 1、质粒构建：构建好含有CRISPR-Cas9系统的质粒，其中包括lentiCRISPR-sgRNA。该质粒携带sgRNA序列，可指导Cas9蛋白准确识别并切割目标基因（之前已详细描述过）。 2、慢病毒包装质粒：准备慢病毒包装质粒，其中包括pCMV-VSV-G（携带包膜蛋白）和pCMV-dR8.2 dvpr（携带包装蛋白）。这两者协同作用，使得慢病毒能够高效地传递CRISPR-Cas9系统到目标细胞内。 3、细胞培养：使用适宜的培养基培养目标细胞，通常选择293T细胞，以确保细胞处于最佳的生长状态。 4、转染试剂准备：在进行转染前，将培养基更换为适用于阳离子脂质体转染的Opti-MEM减血清培养基。同时，准备转染试剂，包括Lipofectamine 3000、助转剂P3000以及含有CRISPR-Cas9系统的 ………………………………