【科研】细胞冻存tips (操作简单 快捷有效）

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一、提前准备        DPBS、基础培养基、血清、双抗、胰酶、细胞冻存液、细胞冻存管、移液枪、枪头、废液缸（紫外照射灭菌15分钟） ②配置完全培养基（50ml离心管）：44.5ml基础培养基（DMEM/DF12/1640）+5mlFBS+500ul双抗. ③ 弃去旧培养基 ④ 加入DPBS2-3ml（100cm2培养瓶3ml、10cm培养皿2ml）清洗×3 ⑤ 尽量吸干DPBS，加入1-2ml （100cm2培养瓶2ml、10cm培养皿1ml）胰酶，培养箱消化 2-3min（具体消化时间根据胰酶浓度和细胞种类而定） ⑥ 显微镜下观察是否脱壁：细胞皱缩变圆或边缘变亮即可停止消化，轻敲培养瓶细胞即可脱壁 ⑦ 加入 4-6ml完全培养基终止消化（胰酶酶：完全培养基=1:2)| 吹打混匀后收集细胞悬液转移至15ml离心管 ⑧1500rpm5min离心 ，弃上清，加入1-2m细胞冻存液重悬细胞（细胞的终密度为1×106/ml−1×107/ml），转移至冻存管中 ⑨ 封口膜封口，做好标记 ………………………………