Western blot没有加loading buffer就煮沸的蛋白样品是不是就不能用了？

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这个是俺的“捡砖”号，欢迎“ 检专 ”的朋友们来一起来检专 在进行Western blot实验时，loading buffer的作用非常重要。它不仅能① 帮助蛋白质变性 ，还能② 在电泳过程中稳定蛋白质的结构 ，并在③ 转膜和免疫检测过程中提供可视化的标记 。loading buffer通常包含一些成分，如SDS（十二烷基硫酸钠）、甘油、β-巯基乙醇和染料等。 如果没有加入loading buffer就直接煮沸样品，可能会导致以下问题： 1.蛋白质聚集： 缺少density agent，蛋白质可能 无法沉入凝胶孔底 ，影响分离效率。 2.电泳不均： 缺乏指示染料，难以判断电泳进程，可能导致过度或不足电泳。 3.二级结构保留： 未变性蛋白质仍保留部分天然结构，迁移率不同于变性蛋白质，影响实验一致性。 4.蛋白质降解风险： 缺少保护剂，蛋白质可能更容易发生不可逆变性或降解，降低Western blot检测灵 ………………………………