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师兄的这个主意,让我的病毒滴度直接提高两个数量级

丁香学术  · 公众号  · 科研  · 2024-10-12 16:58
    

主要观点总结

文章主要讨论师弟实验中遇到的病毒滴度不足问题,师兄建议尝试弱启动子和不同血清型的AAV病毒解决方案,最终成功提高了病毒滴度。同时,文章还介绍了AAV病毒在实际应用中的一些问题,包括如何选择血清型、提高感染效率、影响目的基因表达效果的因素等。

关键观点总结

关键观点1: 病毒滴度不足问题

师弟实验中遇到的病毒滴度不足问题,通过尝试师兄建议的弱启动子和不同血清型的AAV病毒解决方案,最终提高了病毒滴度。

关键观点2: AAV病毒的应用问题

介绍了AAV病毒在实际应用中的一些问题,包括如何选择血清型、提高感染效率、影响目的基因表达效果的因素等。

关键观点3: 如何选择血清型

在挑选 AAV 血清型之前,需要考虑多种因素,例如治疗基因呈递效率、基因持续表达时间、体内生物分布情况等。

关键观点4: 提高 AAV 病毒感染效率

除了 AAV 血清型的选择,注射方式、注射位点以及注射量等也会影响 AAV 的感染效率。


文章预览

师弟 师兄,我的荧光计数结果显示病毒滴度远远不够,组会汇报在即,要完蛋了! 你的是促凋亡相关基因,这种基因对包装细胞是有毒性的,试试弱启动子。 师兄 师弟 哦!对,我马上去试试。如果换了启动子还是不行呢? 也可以尝试其他血清型的 AAV,不同血清型对细胞的感染效率和毒性可能不同。 师兄 师弟 果然,听了师兄的主意,病毒滴度从10^ 7 pfu/ml 提高到了 10^ 9  pfu/ml,组会有救了! 利用病毒载体导入外源基因已成为科研人实验的常用手段,其中涉及病毒载体选择、病毒包装、感染等多个步骤。根据不同的实验目的,过表达 or 敲低,体内 or 体外实验来选择合适的病毒载体。当自己实验中,才发现仿佛化身为「十万个为什么」,遇到的各种实验意外状况。 为什么同个步骤包装后的病毒滴度忽高忽低?为什么我的病毒感染效率低?为什么 ………………………………

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