甲基化特异性PCR（MSP）实验全流程与实验结果

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MSP法的原理是基于DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。基于这种碱基的改变，然后根据甲基化位点设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应（PCR）扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。 这种方法适于研究中大量样本的DNA片段，具有方便快捷，灵敏度高的优点，是目前较为常用的甲基化检测方法。 一、实验方法 参考文献PMID：20215641 1 DNA提取 应用基因组DNA提取试剂盒，按试剂盒说明书进行操作，提取基因组DNA，应用紫外分光光度法测定DNA浓度和纯度 ，置于-80℃冰箱保存备用。 2 MS-PCR 采用EZ DNA Methylation Kit (Zymo Research，USA) 对DNA进行亚硫酸钠处理，利用反应柱进行脱硫及净化，纯化后DNA可用于后续PCR反应，针对××基因启动子CPG岛富 ………………………………