实验解析｜PCR实验的常见问题及解决方案

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一、PCR实验概述 PCR，即多聚酶链式反应，是一种简单便捷且高效的DNA扩增技术。在PCR实验中，往往会出现一些异常问题，以下对常见的一些问题进行了分析，并给出了解决方案，希望对大家有所帮助。 二、常见问题及解决方案 1、假阳性 原因：可能是引物特异性不好/靶序列太短或引物太短或者靶序列或扩增产物出现交叉污染。 方案： （1） 引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验； （2）除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒； （3）操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外； （4）各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存。 2、假阴性，不出现扩增条带 原因：引物设计有问题或者引物浓度不对或引物发生降解； 模板含有抑制物，含量；Buffer对样 ………………………………