主要观点总结
本文介绍了如何判断qPCR数据的可用性以及相应的处理方法。判断依据包括Ct值、溶解曲线和扩增曲线。文章还介绍了qPCR数据的分析方法，包括绝对定量和相对定量，重点阐述了相对定量的计算方法。最后，文章提供了简单操作即可星标医药速览的方法。
关键观点总结
关键观点1: 判断qPCR数据是否可用的依据
Ct值、溶解曲线和扩增曲线是判断qPCR数据是否可用的主要依据。Ct值应在合理范围内，溶解曲线应展示特征峰且无杂峰，扩增曲线应呈S型并具备平台期。
关键观点2: Ct值的定义及处理方法
Ct值是PCR过程中扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。当Ct值偏大或小时，可以通过调整模板浓度等方法进行改善。
关键观点3: 相对定量的计算方法
相对定量的计算主要采用双标曲线法和公式=POWER (2，-ΔΔCt)。计算过程中需注意ΔCt和ΔΔCt的求解，以及平行孔之间Ct值的差异控制。
文章预览
01 如何判断qPCR数据是否可用？ 判断依据1，Ct值在合理范围内 Ct值的定义：PCR过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。 特别是目的基因的Ct值如果超过了35，也可以用，但是可能会影响最后实验结果的判断。所以Ct值偏大最好重复一遍。 a. Ct过大：通过提高模板浓度等进行改善； b. Ct过小：通过稀释模板等进行改善。 判断依据2，溶解曲线（Dissociation curve） Ct当然是首要看的数据值，但是紧接着就要看溶解曲线了，如果溶解曲线不对，那么Ct再好都要重来。 熔解曲线上有特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），一般通过熔解曲线判断扩增产物是否单一。 1）TM在75-90之间； 2）单峰无杂峰； 3）峰距在5个TM内最好。 下面展示比较好的例子 下面是异常的溶解曲线，如果是下面跑出来的Ct值，是肯定要
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