刘亮课题组解锁Cas9反式切割活性并开发新型核酸检测工具 |《自然-生物技术》论文

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研究背景       近年来，随着V型和VI型CRISPR-Cas系统效应核酸酶反式切割活性的发现，CRISPR检测技术在分子诊断领域受到了广泛关注。其中，基于Cas13a的反式ssRNA切割活性和Cas12a的反式ssDNA切割活性开发的SHERLOCK和DETECTR等检测系统，可用于快速、灵敏、特异地检测目标核酸分子。Cas9作为II型CRISPR-Cas系统的效应核酸酶，凭借其高效的核酸靶向和顺式切割活性，成为了目前基因编辑领域使用广泛的核酸操作工具。与Cas12a和Cas13a不同，之前的研究表明，sgRNA引导的Cas9仅具备顺式切割dsDNA的活性，而不具有反式切割核酸的能力。 研究结果       厦门大学刘亮教授课题组发现crRNA与tracrRNA引导的Cas9在识别目标核酸后展现出高效的反式切割活性，并以此开发了两款名为DACD（DNA-activated Cas9 Detection）和RACD (RNA-activated Cas9 Detection)的核酸检测工具。研究人员首先通过 ………………………………