干货+福利 | 从蓝图到现实--探索mRNA的体外转录工艺

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IVT（In Vitro Transcription）作为 mRNA 生产工艺中最核心的步骤，良好的 IVT 体系既可以提高产量，减少物料用量，降低生产成本，也可以保证 mRNA 分子完整度、加帽率、dsRNA 杂质掺入等核心质量指标的表现，降低下游纯化工艺难度，在整个工艺环节起着承上启下的作用。 IVT 反应整体过程较为简单，标准的 IVT 体系主要包含 DNA 模板、T7 RNA 聚合酶（T7 RNAP）、NTPs、无机焦磷酸酶、RNase 抑制剂及反应 buffer 等组分。 DNA 模板作为 mRNA 转录的模板，一般为 PCR 产物或线性化质粒，包含了 T7 启动子、5’UTR、CDS、3’UTR 和 Poly（A）等原件；NTP 作为 mRNA 转录底物，可以通过替换为修饰核苷酸，达到对 mRNA 进行修饰，提高稳定性、免疫原性等目的；无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂作为辅助组分，无机焦磷酸酶可以水解转录过程中产生的大量的焦磷酸，提高反应效率，RNase ………………………………