如何制备透射电镜（80-120kV）生物样品？

主要观点总结

本文主要介绍了生物样品的制备过程以进行透射电子显微镜（TEM）观察。由于生物样品通常含有大量水分，其制备过程复杂，包括颗粒样品和细胞组织样品的处理。颗粒样品可通过负染色法或快速冷冻法制备，而细胞和组织样品需要经过固定、脱水、置换、包埋、超薄切片和染色等步骤。

关键观点总结

关键观点1: 生物样品的特性

大多数生物样品都是含水的或水合的，含有大量的水分，质地柔软，由轻元素组成，不具有导电性。

关键观点2: 颗粒样品的制备

颗粒样品可以通过负染色法或快速冷冻法制备。负染色法使用含重金属的化学物质来覆盖或部分覆盖颗粒，以在TEM中呈现相反的对比度。

关键观点3: 细胞和组织样品的制备

细胞和组织样品制备过程包括固定、脱水、置换、包埋、超薄切片和染色等步骤。固定是保持细胞或组织的超微结构的关键步骤。

关键观点4: 制备过程中的注意事项

制备过程中需要注意样品的处理、染色的方法和条件、以及树脂的聚合条件等，以确保样品的电子透明度和高分辨率。

文章预览

与干燥和浓缩的材料样品不同，大多数生物样品都是含水的或水合的，含有大量的水分。它们质地柔软，由 H 、 C 、 N 、 O 、 S 和 P 等轻元素组成，且不具有导电性。因此，生物样品的制备需要多个步骤才能获得 TEM 样品。生物样品通常包括 颗粒样品以及细胞和组织样品 。 1  颗粒样品 如果样品是含有颗粒或纤维的液体溶液，可以在室温下通过负染色法制备，或在低温下通过快速冷冻法制备。 负染色过程如图 1 所示。通常情况下，未经染色的颗粒在 TEM 中呈现为暗色图像，这是因为颗粒散射和吸收入射电子（散射吸收对比度）。然而，含水样品不能直接放入 TEM 进行成像。负染色需要使用含重金属的化学物质来覆盖或部分覆盖颗粒，具体取决于样品、支撑膜和染料的性质。在任何情况下，当样品干燥后进行成像时，在 TEM 投影中，颗粒样品区域呈 ………………………………