手把手教学｜同源重组法质粒构建的实验步骤及注意事项

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同源重组法质粒构建在基因功能研究、蛋白表达和纯化的等方面具有广泛的应用。内容包括了基因的敲除、敲低以及过表达等等，用于研究基因的功能、表达调控机制以及对细胞生理过程和表型的影响。另外通过优化启动子、核糖体结合位点等表达元件，以及选择合适的宿主细胞，利用同源重组法构建表达载体，使目的蛋白在宿主细胞中大量表达，从而达到目的蛋白表达和纯化的目的。 通过同源重组构建重组 MVA 载体 相较于传统酶切传统酶切法依赖于限制性内切酶对DNA的特异性切割而言，同源重组法质粒构建基于DNA分子间的同源序列进行重组。 因此这里主要介绍同源重组法质粒构建的实验步骤和注意事项等。 一、流程图 二、实验步骤 1.获取插入目的片段： （1）引物设计：在插入片段正反向扩增引物的5’端引入线性化载体两末端同源序列，使扩 ………………………………