Nat. Chem. Biol│最小化靶标扩增的干扰以实现CRISPR的快速和灵敏检测

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摘要 ： 尽管基于 CRISPR 的检测具有巨大潜力，但它在现场和家庭检测方面很难与其它市场诊断产品竞争。在这里，作者剖析了影响 Cas12b 和 Cas13a 介导检测性能的限制因素。在一锅法检测中， Cas12b 通过结合并切割扩增子干扰环介导等温扩增，而 Cas13a 则直接降解病毒 RNA ，减少其扩增。作者发现，工程化的与原间隔序列邻近基序相互作用域的 Cas12b 可以用于一锅法检测，灵敏度提高 10 到 10,000 倍，成功实现了 85 个 SARS-CoV-2 临床样本中的准确检测，灵敏度为 0.5 cp μl −1 ，使其优于野生型 Cas12b 。同时，通过减少 Cas13a 与病毒 RNA 的相互作用，优化的基于 Cas13a 的检测在室温下 30 分钟内检测了 87 个 SARS-CoV-2 临床样本中的 86 个，灵敏度为 0.5 cp μl−1 。拓宽的反应条件和改进的 CRISPR 检测性能使它们在病原体检测中具有更强的竞争力。 图： 一锅法检测图 ………………………………