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【业务介绍】蛋白质印迹法(Western Blot)

伯远生物  · 公众号  ·  · 2025-01-08 09:00
    

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  原理简介   蛋白样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离后,从凝胶转移到固相载体(如PVDF膜、NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。WB技术在生物研究领域广泛应用于检测蛋白水平的表达,比如研究基因在不同组织、不同生理状态下的蛋白表达差异等诸多方面。   实验流程   (1)电泳分离蛋白质,由裂解细胞或组织制备目的蛋白质样品,经SDS-PAGE电泳处理后,不同分子质量大小的蛋白质得到分离。 (2)转膜,将电泳分离的条带从凝胶转移至NC/PVDF膜上。常用的方法是电洗脱或电泳转移,形成“ ………………………………

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