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流式细胞术检测细胞凋亡的大致原理为:一般情况下是采用两种染料PI和Annexin V对细胞进行染色,Annexin V可选择性结合磷脂酰丝氨酸,从而检测细胞的早期凋亡,而PI可以染坏死和晚期凋亡的细胞,两种染料联合使用从而对细胞凋亡进行检测。 实验步骤: 1)细胞铺板:流式凋亡检测常用6孔板铺细胞,初始密度由实验要求决定,常规细胞铺板后密度达到要求即可收细胞,收细胞时应选择在细胞状态最好的时候进行。 2)开始收细胞前准备好冰浴的PBS缓冲液。 3)收集细胞时,吸出原培养基暂存离心管内,每孔加入500μl不含EDTA的胰酶消化细胞,时间由细胞本身决定,和正常消化细胞时间相近即可,期间注意观察细胞状态, 消化时间不宜过长,防止出现假阳性, 加入收集的原培养基终止消化,将细胞全部吹下收集到离心管内,离心机室温1000g离心5min。 4)弃
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