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CRISPR-Cas系统作为一种革命性的基因编辑工具,因其操作简单、编辑精确、效率高等特点,已在分子生物学和基因治疗领域得到了广泛应用。CRISPR基因编辑技术中的Cas蛋白,如Cas12a和Cas13a,能够特异性靶向核酸,并激活反式切割活性,非特异性持续切割单链核酸报告基因。Cas酶的反式切割特性使得检测信号可以被放大,提高了检测的灵敏度,推动了CRISPR技术在超灵敏分析和分子诊断领域的发展。然而,目前这些Cas酶主要用于试管内分析,而在活细胞中的应用受到限制。主要原因为:一、RNA激活的Cas13a会对胞内功能性RNA进行非特异性反式切割,可能对细胞造成伤害,而Cas12a虽然仅反式切割单链DNA,但能否被胞内RNA激活尚未明确;二、活细胞内条件无法达到最佳切割活性,包括 Mg 2+ 离子、报告基因浓度等,受限于复杂的胞内递送过程。因此,亟需开发
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