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PCR原理与引物设计教程分享

SCIPainter  · 公众号  ·  · 2024-08-23 11:01
    

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聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术。1983年,Kary Mullis发明了用于扩增目标DNA的PCR方法,也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR技术因其高效、灵敏、特异性强,已成为分子生物学研究和应用中的一种基本工具。 常见的PCR种类分为常规PCR、逆转录PCR、实时定量PCR(RT-qPCR)、巢式PCR(Nested PCR)、直接PCR等,例如,下图为使用丝状真菌生物质的直接PCR的流程。 ( Bio-protocol , 2023) 1.PCR原理 PCR是一种能够在短时间内将单个DNA分子扩增数百万倍的生化过程,其反应体系主要包含模板DNA、引物、DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸(dNTP)、镁离子和缓冲液共六种关键成分。其扩增过程包括三个连续步骤: 变性(Denaturation): 在94-98°C的高温下,双链DNA分子解开,形成单链DNA。 退火(Annealing): 将温度降低到50- ………………………………

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