手把手教学｜Trizol法提取RNA：从样本前处理到操作步骤

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一、实验原理： Trizol试剂的主要成分是苯酚，对细胞进行裂解，使细胞中的蛋白质以及核酸物质解聚。苯酚虽然可以有效的使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。存放在Trizol 中的样品可以在负八十保存半年左右。 二、样本处理方法： 贴壁培养细胞 1. 吸出培养液，细胞用预冷的1×PBS清洗两次。 2. 吸出PBS洗液，然后每1×10^8-2×10^7的培养细胞中加入1mL的Trizol，轻摇培养皿，确保溶液均匀分布于细胞表面。（可用细胞刮刀剥离细胞） 3. 使用移液器反复吹打使细胞脱落，然后将内含细胞的裂解液转移至离心管中，再用移液器吹打直至裂解液中无明显沉淀（溶液清亮）。 4. 室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。 悬浮培养细胞 1. 将悬浮细胞收 ………………………………