主要观点总结
本文主要讲述了作者在独自进行Western blot实验过程中的经验分享，包括实验准备、制胶器使用、转膜、暗室问题、液体使用等关键点，并给出了针对新手的建议和一些实验细节的讨论。
关键观点总结
关键观点1: 找人学习，理解实验原理与步骤。
即使没有师兄师姐带，也要找人跟着学习，对实验原理、步骤等初步理解，每一步都要多次熟悉。
关键观点2: 正确使用制胶器和玻璃板。
制胶器玻璃板、梳子都有规格，需匹配使用。浓缩胶凝固后需正确放入电泳槽中，倒满电泳液后等待一定时间再拔梳子。
关键观点3: 正确识别和使用PVDF膜。
转膜时需用正确的PVDF膜，蓝色纸中间夹的白色纸才是PVDF膜。
关键观点4: 建立合适的暗室环境。
暗室需无窗户，用黑塑料袋封上门上的窗户。曝光过程中墙缝透光不影响曝光过程。红灯要求不是非常严格，可以用红色显示的培养箱或特定灯泡。
关键观点5: 液体使用与回收。
电泳液可以使用回收液，但要保证液体不浑浊。TBST建议现配现用，但如果未变质可以多次使用。封闭液需现配现用。
关键观点6: 实验中的其他细节问题。
洗膜可以只进行两步，一抗和二抗孵育后其余步骤可不洗。上样量、一抗二抗稀释比等需要根据实际情况调整。封闭时间建议至少2小时，二抗孵育时间1小时足够。
文章预览
新人经验 在正文开始之前，请允许小妹我简单介绍一下个人情况，顺带为即将独自一人做此实验的 xdjm 们打打气。小妹我上无师兄师姐（上届师姐于我开始做实验时已毕业），下无师弟师妹（下届师弟师妹尚未开学），由于种种原因被老板发配到外院一个生物治疗中心进行我的实验。在我开始做 Western 时，制胶器及转膜仪等均未开封，老师们均表示以前也未做过 Western。 所以我是第一个吃螃蟹的人，吃苦或许是注定的。我自己找了一个常做 Western 的帅哥（本不认识）学习了大概两天的样子，就独自一人开始了我的 Western 生涯。从开始到现在总共也不到一个月，所以经验之类我几乎没有，但是之所以斗胆写此文，仅仅不希望下一个与我情况类似的 xdjm 们犯一些低级错误，我犯的低级错误足以让大神们笑掉大牙（后表）。啰嗦这么久，正式开始吧。 1.
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