实验解析｜如何解决Western Blot中的高背景?

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一、 写在前面 Western Blotting（WB）作为常见的蛋白检测手段之一，通常是绝大部分科研工作者不可避免的一项基础实验。然而，其实验流程相对较为复杂，忽视任一细节均有可能导致整个实验的失败，这也常令很多科研者苦不堪言。目的条带不清晰而背景却又黑又脏，甚至显影出来只能看见黑乎乎的背景，这是WB中最为常见的问题之一，是什么原因导致了高背景的出现？面对这种情况我们该如何解决呢？本文就从以下几个方面进行详细地介绍。 二、 常见的背景来源及解决方案 1．样品质量 样品质量是决定WB成败的关键一步，绝大多数情况下我们均是以提取总蛋白作为WB的开端。而在总蛋白提取过程中不可避免会受到诸如核酸、脂类、裂解液等物质的干扰，样品纯度受到影响自然而然会带来高背景。此外，在我们目的蛋白表达量较低的情况下，其在 ………………………………