circRNA分析方法|基于RP-HPLC检测circRNA纯度

文章预览

导读： 环状RNA（circRNA）因其稳定的闭环结构、持久的蛋白表达能力和低免疫原性而受到关注。由于circRNA独特的制备流程导致的副产物（如线性RNA前体和nicked circRNA），纯度是circRNA疫苗或药物的关键质量属性之一。 目前，监管机构尚未发布专门针对circRNA质量控制研究的指导性文件。据文献报道，常用的分析方法（如琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳）无法有效区分circRNA和nicked circRNA。有效的circRNA纯度分析方法仍有待开发。 本期文章，菌菌将参考中检院研发人员于2024年最新发表的文献，分享一种有效的circRNA纯度分析方法——RP-HPLC。 01 cicrRNA纯度分析方法概览 首先是circRNA合成过程中的杂质类型。 以当前主流的基于内含子自剪接环化的PIE环化方法为例，circRNA体外制备流程如下：首先是合成线性RNA前体（precursor RNA，pre-mRNA），这一过程与线性mRNA类似， ………………………………