手把手教学｜镍柱纯化实验原理及操作步骤

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实验原理 Ni-NTA是镍柱纯化常用的一种填料，镍柱纯化常指亲和层析，该方法利用组氨酸（His）残基上的咪唑基团与Ni 2+ 之间能形成配位键的特性，实现对含有His-Tag（组氨酸标签）的目的蛋白的特异性吸附。 His-Tag是重组蛋白纯化中最常见的标签之一，其通过融合表达与目的蛋白相连，从而赋予目的蛋白与镍柱结合的能力。在层析过程中，杂蛋白因不带有His残基无法与Ni 2+ 结合，从而实现了目的蛋白与非目的蛋白的有效分离。 操作步骤 ① 准备工作： （1）根据目的蛋白的性质，选择合适的镍柱类型和洗脱方式，配制合适PH值的缓冲液和洗脱液。 （2）缓冲液和洗脱液在蛋白纯化操作前用0.45 μm或0.22 μm滤头过滤除菌避免污染镍柱，减少寿命。 ② 样品预处理： 预处理待纯化的蛋白样品，如离心去除杂质、调整样品的pH值、低浓度咪唑溶液透析以去除 ………………………………