Zhang Feng实现扩展PAM的Cpf1 基因组编辑【Nature Biotech】

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生物极客导读： RNA引导的核酸内切酶 Cpf1 是真核细胞基因组编辑工具中非常有前途的工具。然而，常用的Acidaminococcus sp. BV3L6 Cpf1（ AsCpf1 ）和Lachnospiraceae bacterium ND2006 Cpf1（ LbCpf1 ）受到其在DNA底物中的TTTV原始相邻基序（PAM）的要求的限制。为了解决这个限制，张峰进行了一个 结 构引 导诱变筛选 ，以增加Cpf1的靶向范围。科学家们设计了携带突变S542R / K607R和S542R / K548V / N552R的两个AsCpf1变体， 其分别识别 TYCV 和 TATV PAM ，具有增 强 的体外和人 细 胞活性。 使用BLISS方法进行全基因组脱靶活性的评估表明，这些变体保持高DNA靶向特异性，通过引入额外的非PAM相互作用突变进一步改善高保真性。在LbCpf1的相应位置引入鉴定的PAM相互作用突变，同样改变了其PAM特异性 ………………………………