实验答疑 | 做好 Western Blot，哪些操作技巧很关键

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Western Blot 操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，从试剂与设备的选择到实验条件的摸索，都很关键。 如果初学者想要做好 Western Blot，记住以下的操作技巧，或许能够事半功倍。 注：以下内容节选自毛阿懋老师《献给初学者：WB 操作步骤》  一、蛋白质的样品制备:  > 蛋白质在样品处理过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（加入合适的蛋白酶抑制剂）。 > 样品建议分装成合适的量（比如分装出 20 μL  检测蛋白质定量用），然后 -20°或 -80℃中长期保存，注意不要反复冻融，因为会使蛋白的抗原特性发生改变。 > 切莫使用不新鲜的上样缓冲液，同时在处理时应注意将样品与 loading buffer 混合均匀。  二、蛋白质定量： >如果要定量的话，一般选择 BCA 或者 Bradford 方法，BCA 要求检测波长为 562nm，Bradford 为 595nm。具体方 ………………………………