手把手教学｜细胞系基因敲低实验方法：shRNA

文章预览

细胞系基因敲低常见的方法包括：shRNA、siRNA、CRISPR/Cas系统及sgRNA，我主要分享shRNA敲低细胞系表达的方法，其大致原理为将shRNA连接到PLKO的质粒中，将质粒转染进细胞，在细胞质中，质粒可以转录出一段与目的基因互补的单链RNA，这条互补RNA与目的基因的mRNA互补结合后，会特异性的将目的基因的mRNA降解，从而使目的基因翻译的模板减少，达到敲低目的基因的效果。 主要的方法步骤如下： 1.shRNA序列设计： shRNA可在网页在线设计，设计完成后送至公司合成。 2.shRNA序列退火 1)将公司合成的shRNA序列常温4000rpm离心1min，按包装管上的指示加入相应微升的超纯水到相应的浓度，根据实验所需取部分稀释到10μmol。 2)水浴锅提前设置到95℃，退火体系50μL按下表依次加入相应试剂，95℃退火4min。 3)退火完成后，等待水温自然冷却至手温后，可将退火后的shRNA放 ………………………………