手把手教学｜质粒载体构建的实验步骤及经验分享

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质粒载体是分子生物学研究中使用十分普遍的工具之一，含有我们目的片段的质粒常常通过转染细胞用于体外探究外源基因的生物学功能。通过对基因进行修饰例如点突变、过表达、敲低、敲除等手段获得不同质粒，这为一些分子生物学实验例如功能增益缺失实验、双荧光素酶报告基因实验都提供了便利的基础。 质粒构建，我们首先需要获取我们需要构建在原生质粒载体上的目的片段，如过表达载体一般会构建目的基因的cds区，双荧光素酶报告基因载体一般是构建包含结合位点的目的片段，其次我们可以根据选定的目的片段通过Snapgene软件进行引物设计。获取目的的片段后，我们需要对获取的目的片段和选取的质粒载体进行双酶切暴露出粘性末端；然后用T4连接酶进行酶连。连接产物通过感受态细胞（DH5α）转化，最后进一步对单克隆菌落进行鉴定 ………………………………