手把手教学｜Trizol法和柱式法RNA提取的实验流程和注意事项

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（一）Trizol法 一、 实验原理 Trizol是一种酸性试剂，能从细胞和组织中快速分离RNA，其主要成分为异硫氰酸胍（GITC）和苯酚。裂解细胞后，GITC能使蛋白质和RNase变性，有利于保护RNA的完整性；加入氯仿离心后，样品分为水相和有机相，RNA存在于上层水相中，而DNA和蛋白质则存在于中间层及下层有机相中，从而达到分离的目的。简单来讲就是裂解细胞使RNA得以释放，加之有机溶剂使RNA与DNA、蛋白质分离，并进一步纯化得到RNA的过程。 二、 主要的试剂、仪器与耗材 Trizol 试剂、氯仿、异丙醇、75%乙醇、RNase free Water、低温冷冻离心机、匀浆器或组织研磨器、涡旋振荡器、金属浴、微量移液器、通风橱、计时器、1.5ml EP管等。 三、 提取步骤 1.样品的制备 1)细胞：按1ml Trizol试剂/5-10×10^6细胞的比例加入Trizol试剂（ 注：一般来讲待细胞在六孔板上生长至80 ………………………………