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来源:诊断科学 检测特定遗传物质的能力一直是众多领域进步的基石,从基因工程到污染物检测,尤其是在诊断测试方面。 随着定量聚合酶链反应(qPCR)的发展,有时也被称为定量实时聚合酶链反应,这些能力在传统PCR的基础上得到了扩展,提供了更好的检测灵敏度和特异性,重要的是,我们可以对目标序列进行精确的定量。 在本手册中,我们将从qPCR的工作原理、实验要求、数据分析和该技术的应用方面出发,对qPCR技术进行一次全面的解析。 什么是qPCR? qPCR是一种选择性扩增和定量检测DNA或互补DNA(cDNA)区域的技术。位于感兴趣区域两侧的寡核苷酸引物用于利用DNA 聚合酶扩增序列[1]。 扩增过程的重复循环导致目标区域的拷贝数呈指数级增长,使用嵌入染料或序列特异性探针对其进行追踪,然后在qPCR设备中检测其荧光并绘制输出图形。 qPCR和
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