【分享】学霸整理的 PCR 资料

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来源：丁香园论坛 我整理的 PCR 资料. 供大家分享. PCR 实验技巧 增加 PCR 的特异性： 1. prime 理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件 a. 足够长,18-24bp, 以保证特异性. 当然不是说越长越好, 太长的引物同样会降低特异性, 并且降低产量 b. GC% 40%～～～～60% c. 5' 端和中间序列要多 GC, 以增加稳定性 d. 避免 3' 端 GC rich, 最后 3 个 BASE 不要有 GC, 或者最后 5 个有 3 个不要是 GC e. 避免 3' 端的互补, 否则容易造成 DIMER f. 避免 3' 端的错配 g. 避免内部形成二级结构 h. 附加序列 (RT site, Promoter sequence) 加到 5' 端, 在算 Tm 值时不算, 但在检测互补和二级结构是要加上它们 i. 使用兼并引物时, 要参考密码子使用表, 注意生物的偏好性, 不要在 3' 端使用兼并引物, 并使用 较高的引物浓度 (1uM-3uM) j. 最好学会使用一种 design software. PP5 ………………………………