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简直强的可怕,磷酸化蛋白WB的成功经验总结!

科研根号三  · 公众号  ·  · 2024-05-10 16:36
    

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WB几乎是广大科研人的必修实验技术,普通蛋白的WB或许可以做的得心应手,但是做磷酸化蛋白WB经常会出现 曝不出条带 的情况! WB检测蛋白质磷酸化其实和跑正常蛋白的大体步骤没什么出入,只不过孵育的是识别磷酸化的抗体;同时由于磷酸化蛋白 反应快,降解快,表达量少 ,也有非常多的小细节需要格外注意! 相关内容: 实验室祖传!Western Blot 实验全流程步骤+常见问题解决方案! Part.1 蛋白质磷酸化背景知识 蛋白质是组成人体细胞、组织的重要成分,新的蛋白质多肽要转变为成熟蛋白质,需要经过蛋白翻译后修饰。 翻译后修饰包括: 磷酸化、糖基化、甲基化、羟基化、脂酰化、羧基化等共价修饰。其中蛋白质磷酸化是重要的蛋白质翻译后修饰之一。 蛋白质磷酸化由蛋白质激酶所催化,磷酸化多发生在多肽链 丝氨酸,苏氨酸 的羟基上,偶 ………………………………

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