手把手教学｜质粒转化操作步骤及经验分享

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转化是指将质粒DNA导入细菌的过程，通过热激、冰浴、摇菌、挑菌等过程达到质粒克隆、质粒鉴定等目的，质粒转化前需准备的试剂包括：感受态细胞、质粒、无抗生素的LB液体培养基、氨苄抗性LB固体培养基平板，耗材及实验设备包括：摇菌管、Ep管、超净台、涂菌棒、酒精灯、水浴锅等。 实验步骤: 1.提前将感受态细胞放置在冰盒上解冻，准备好质粒和相应数量的1.5mL EP管。 2.感受态细胞解冻后取50μL加入EP管中，再加入0.5-1μL质粒，冰浴30min。 3.水浴锅42℃热激60s，继续冰浴5min。 4.在超净台内加入无抗性的LB液体培养基500μL，摇床设置37℃速度180rpm，孵育15-30min。 5.常温离心机设置4500rpm，离心5min。 6.离心结束后去上清530μL左右，剩余部分用移液器轻轻混匀。 7.将LB固体培养基平板标记好基本信息，取上述液体约10-20μL进行涂板，涂板完成后倒置在37 ………………………………