抗体药物发现的主要技术及开发流程

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抗体药物发现涉及多种技术平台，每种技术具有独特的方法步骤、质控要点和开发标准（   https://doi.org/10.1186/s12929-019-0592-z ）。 以下是主要技术的梳理： 1. 杂交瘤技术 方法步骤： 1. 免疫动物：使用抗原免疫小鼠，佐剂（如弗氏佐剂）增强免疫应答，定期检测血清效价。 2. 细胞融合：取脾细胞与骨髓瘤细胞（如SP2/0）通过聚乙二醇（PEG）融合。 3. 筛选阳性克隆：HAT培养基筛选杂交瘤，ELISA/FACS检测抗体分泌。 4. 亚克隆与扩增：有限稀释法进行单克隆化，扩大培养。 5. 抗体生产：体外培养或小鼠腹水制备。 关键细节： 抗原设计需包含免疫优势表位。 融合后需多次亚克隆确保单克隆性。 抗体亚型鉴定（IgG1/IgG2a等）。 质控要点： 特异性：Western Blot/免疫组化验证。 亲和力：SPR/BLI测定（KD值）。 交叉反应：与类似蛋白/组织交叉测试。 稳定性：4℃/-8 ………………………………