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作为一个实验老手,在其他实验上信手捏来,唯独在构质粒上还处于菜鸟阶段,每次都「谨小慎微」!最近和 00 后小师妹一起做分子克隆,我真是被上了一课: 做 DNA 片段扩增时 我 多次检查试剂的添加量和仪器的设置参数,还特意增加了 PCR 循环次数。 对着 protocol 设定 PCR 反应体系,设置好循环次数后就去看文献了。 师妹 结果出来后发现,师妹的结果没问题,我的却莫名出现了非特异性扩增问题。 在质粒提取时 我 担心质粒提取量不足,加大了菌液的使用量。 按比例分了几份,取了适当的量之后就开始做提取了。 师妹 没想到过多的菌液会导致裂解不彻底、杂质变多,后续的纯化步骤变得困难,质粒的纯度和得率反而下降。 左右滑动查看更多 全程目睹这一切的导师直呼让我放轻松,然而分子克隆实验涉及到 核酸提取、酶切、连接、转化 等诸
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