手把手教学｜Dot blot法鉴定分泌型蛋白表达

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实验原理： Dot blot是一种半定量的蛋白质或核酸检测方法，其原理是将待测物直接滴于固相载体上，然后通过特异性抗体或探针与待测物结合，最终通过可视化方法来检测目标分子的存在与否。 溶液配置： 操作步骤： （1）减取适当大小的PVDF膜，于甲醇活化1分钟。 （2）将活化后的PVDF膜于ddH2O中，在脱色摇床上清洗15分钟。 （3）提前预冷离心机，将样品在4℃低温条件下8000 rpm离心15分钟，取上清作为样品（分泌型蛋白）。 （4）取出活化后的PVDF膜在室温晾至半干，看见水膜消失即可。将收集的上清、空白对照、阳性对照分别取5 μl点样至PVDF膜上，风干。室温待样品吸收，样品吸收后点样处颜色加深。 （5）封闭：待PVDF膜上样品完全干燥后，于含5%脱脂奶粉的TBST溶液中封闭，37℃培养箱孵育2h或者4℃过夜孵育。 （6）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分钟。 ………………………………