国自然申请|研究“蛋白与DNA互作”的几种经典技术以及注意事项（下）

主要观点总结

本文主要介绍了研究蛋白与DNA互作的四种经典技术：ChIP-Seq/PCR染色质免疫沉淀测序、DNA pull-down实验、DNA EMSA实验以及荧光素酶报告基因实验。文章详细阐述了每种技术的大致步骤、说明以及应用情景。

关键观点总结

关键观点1: ChIP-Seq/PCR染色质免疫沉淀测序

用于研究蛋白质与DNA相互作用的高通量测序技术，主要用于筛选转录因子蛋白的靶基因。

关键观点2: DNA pull-down实验

基于蛋白质与特定DNA序列之间的亲和性，通过特定的DNA探针捕获与其结合的蛋白质，实现对蛋白质-DNA复合物的富集和分析。

关键观点3: DNA EMSA实验

用于验证DNA与蛋白结合的经典方法，通过观察蛋白-探针复合物在电泳中的迁移率来判断蛋白与DNA的结合情况。

关键观点4: 荧光素酶报告基因实验

研究转录因子对靶基因DNA转录调控活性的经典实验之一，通过测量荧光素酶基因的活性来反映转录因子与靶基因启动子区域的相互作用。

文章预览

本周六直播预告： 承接上期我们介绍了在研究蛋白与 DNA 互作的注意事项（ 国自然申请|研究“蛋白与靶基因DNA互作”的几种经典技术（上） ）后，我们把研究方法汇总一下。如前所述，在研究蛋白与 DNA 互作的方法中，大致有两个角度： 确定蛋白与 DNA 结合，以及确定转录调控作用 两个。 一、ChIP -Seq/PCR 染色质免疫沉淀测序（ Chromatin Immunoprecipitation, ChIP ））是一种用于研究蛋白质与 DNA 相互作用的高通量测序技术。它可以用来识别特定蛋白质（通常是转录因子或组蛋白修饰）在基因组上的结合位点。 大致步骤： 1 ）免疫沉淀 ：首先，细胞被固定，通常是通过甲醛交联，这样可以保持蛋白质和 DNA 之间的相互作用。然后，使用针对特定蛋白质的抗体进行免疫沉淀，将目标蛋白质及其结合的 DNA 一起沉淀下来。 2 ） DNA 片段化 ：交联被逆转后， DNA ………………………………