Nucleic Acids Res.│CRISPR-Cas12a 表现出金属依赖的特异性切换

文章预览

摘要 ： Cas12a 是 V-A 型 CRISPR-Cas 系统的免疫效应器，已被用于基因组编辑和其他生物技术。 Cas12a 的特异性一直是体外和基因组编辑实验中广泛研究的主题。然而，体外研究通常在高镁离子浓度下进行，这与细胞中存在的游离 Mg 2+ 浓度不一致。通过在一系列 Mg 2+ 浓度下分析 Cas12a 同源物的特异性，作者发现 Cas12a 根据金属离子浓度切换其特异性。 Mg 2+ 浓度的降低减少了由种子错配引起的切割缺陷，同时增加了由 PAM 远端错配引起的缺陷。作者展示了在低 Mg 2+ 浓度下， Cas12a 可以更快地结合种子突变靶标，从而实现更快的切割。相比之下， PAM 远端错配在低 Mg 2+ 浓度下形成 Cas12a- 靶标复合物后，会导致切割的显著缺陷。作者观察到三个同源物之间 Cas12a 特异性切换的差异，这导致了噬菌体逃避 Cas12a 介导免疫的不同途径。总体而言，作者的结果 ………………………………