专栏名称: 医药速览
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真·绝对定量!这就是数字PCR!

医药速览  · 公众号  ·  · 2024-09-12 08:30

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   01    简介 1、数字PCR 数字PCR(Digital PCR),是通过将一个样本分开成千上万份,并分配到不同的反应单元,每个单元至少包含一个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析,就可以对目标基因拷贝数进行定量,是一种核酸分子绝对定量技术。 2、数字PCR和qPCR QPCR是依靠标准曲线(绝对定量)或参照基因(相对定量)来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。 数字PCR结果判定不依赖于扩增曲线的循环阈值(Ct),不受扩增效率的影响,具有很好的准确度和重现性。 由于PCR是一个指数过程,因此qPCR只能观察到两倍的扩增差异;数字PCR特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等 ………………………………

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